Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐拓展

从第一次经常出现肝蛋白自身抗质到经常出现1DF哮喘诊疗副作用的令人满意百余人在儿童初就有很好的刻画，多个肝蛋白自身抗质感染性的儿童里面有70%在毒素叠加后10月内身患哮喘，而随访15年的儿童这一数目减小到84%。相较来说之下，占有诊疗1DF哮喘一半以上的DF1DF哮喘的复发的系统还不会取得充分的研究成果。

愈发多的人开始可用分期系统来假定1DF哮喘的令人满意：个质在经常出现多种肝蛋白自身抗质时进入第1阶段，经常出现高血压异常时进入第2阶段，经常出现副作用时进入第3阶段。一些多发肝蛋白自身抗质感染性的个质，在1期和2期，令人满意较慢，并工业发展为复发的1DF哮喘。我们先前刻画了一第三组在首次检测到多种肝蛋白自身抗质检验后仅仅10年无哮喘的极慢令人满意者，这第三组高血压人数少，但特质非常确实。随后，我们发现肝蛋白自身上皮细胞特异性CD8+T蛋白反应以在令人满意平稳的高血压里面基本不存在，但在近期复发和长期存在的哮喘高血压里面很难以检测到。这也许断定，与令人满意高血压相较来说，这些高血压自身抗体以的调节增强。

早期研究成果断定，尽管调节性T蛋白(Treg)数量正常人，但哮喘高血压存在一些功能缺陷，其里面最主要对IL-2的反应以能力减小。此外，哮喘高血压里面的现象CD4+T蛋白也许对调节更具抵抗性，显出为现象T蛋白的消除减弱，自然环境产生的Treg和质外产生的其会Treg，以及上皮细胞经历的CD4+T蛋白里面IL-2反应以减弱。本研究成果的目地是刻画了CD4+调节性T蛋白(Treg)在一个大极平稳令人满意者里面的特质，他们的平均年龄组为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以人群结合的垂直研究成果，在21岁以下确诊的高血压亲人里面检查1DF哮喘的危险因素。我们先前刻画了长期平稳令人满意者的特质，他们保有多重肝蛋白自身抗质感染性超过10年，但不会经常出现哮喘的诊疗副作用，慢性或非透过性自身免疫。随后，10名继续保有无哮喘并愿意缺少大量肠道检验的平稳令人满意者纳入T和B蛋白功能研究成果。在目前的研究成果里面，8名慢令人满意者(SP第三组)，里面位年龄组43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的肝蛋白自身抗质感染性。所有的举例来说都受制于1DF哮喘令人满意的1期，尽管一些人随后挽回了肝蛋白自身抗质对某些上皮细胞的感染性以，然而，一名高血压已经受制于2期仅仅6年，但不会经常出现诊疗副作用，一名高血压被诊断为哮喘，该受试者72岁，在采集实验检验时，其HbA1c上升时到53 mmol/mol(7%)，在数据研究成果里面对该小分子透过了单独评量。分离外周血单个核反应蛋白(PBMCs)，采用多参数流式蛋白法术和T蛋白消除试验评量小分子里面Treg的kHz、表DF和功能。可用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、总括和回归)透过无行政官员聚类研究成果，评量Treg表DF。

结果：与身心健康小分子相较来说，来自慢令人满意质的无意识CD4+T蛋白的行政官员聚类说明了，诱导的无意识CD4+ TregkHz减小，与止痛药其会的TNFR相关蛋白(GITR)传达减小有关。一名HbA1c上升时的高血压与令人满意平稳者和转换的对照第三组相较来说，Treg谱大致相同。功能研究成果断定，与身心健康小分子相较来说，来自平稳令人满意质的Treg酪氨酸的CD4+现象T蛋白消除明显损害。显出为对现象CD4+T蛋白CD25和CD134传达的消除减小。

平面图1 深入的表DF研究成果说明了，CD4+Treg亚DF在慢令人满意表头里面减小。由FlowSOM转化的Treg室，聚集在来自所有小分子的活CD4+CD45RA -蛋白上。根据标示物传达鉴定出10个元簇:无意识T蛋白_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T蛋白;HLA-DR + GITR +无意识T蛋白;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)可用9个相同Treg标示转化的10个元簇的MST。每个路由代表一个一个大(100个一个大)，更大的元一个大(10个元一个大)在路由第三组周围剪裁。每个路由里面的饼平面图指出单个标示的传达级别。(b)每个元聚类的热平面图，以说明了整质标示传达。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)转化平面图，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖层。(e-l)相较核反应素为每个metacluster箱本站平面图(核反应素> 0.05%)确定为HD和SP第三组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T蛋白(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T蛋白(l)。绿色红色代表慈善机构SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对标记秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 可用CITRUS的预测模DF证实，TregkHz的减小是令人满意平稳的标志。分级门控(a - f)和柑橘研究成果(g-k)比较SP举例来说和转换的HD举例来说在CD4+CD45RA−T蛋白上的差异性。(a)流感病毒CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群质的代表性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3掺入，然后通过HLA-DR和GITR传达透过分离，精心设计FlowSOM群质。(b) HD(黑点)和SP(布氏)第三组以及小分子SP 606(绿色)里面CD25+ cd127的kHz统计平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控闭包的箱本站平面图;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)龙眼簇双螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度着色，斜本站突出的簇被标识为SP和HD表头错综复杂的相同。(j)箱本站平面图说明了了在SP(布氏)和HD(灰点)第三组里面，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相较核反应素(数目)。(k)加权说明了每个簇的表DF(粉红色)和Treg标示相较传达与剧中传达(深蓝色);上列，CPUTreg_3;后面一行，CPUTreg_4。剧中与所有其他簇里面标示的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对标记秩检验

平面图3 与身心健康献血者相较来说，令人满意平稳者无意识treg的GITR减小。每个无意识CD4+T蛋白元簇(无意识T蛋白_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T蛋白;HLA-DR + GITR +无意识T蛋白;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个传达标示的改变。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的传达热平面图(sp606不最主要在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇里面所有HD(粉红色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR传达串联，说明了加权(c)和统计平面图(d)。Wilcoxon配对标记秩和检验，p< 0.07(绿色)所有小分子最主要，p< 0.05(深蓝色)小分子SP 606和转换的HD不最主要在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR传达，从分级门控，从所有HD(粉红色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(绿色)串联，说明了加权(e)和统计平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对标记秩检验

平面图4 来自平稳令人满意的CD4+ treg蛋白依靠现象CD4+T蛋白的能力减小。SP第三组用深蓝色的本站和红色指出，HD第三组用黑色的本站和红色指出，绿色的本站/红色指出小分子sp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白透过分选。CD4+CD25−(应以答者)被标示为CFSE, Treg按捕捉到的数目滴定。用抗CD3 /28微珠其会蛋白，人才3天内透过流式蛋白法术检测。(a-d)与CD4+应以答者相较应以的treg人才(自质)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应以答者人才。(a,b,f) CFSE再生(a,e)和CFSE消除百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除百分比。可用感染性对照(诱导的声势浩大以蛋白不含treg)计算消除百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差研究成果。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 现象CD4+T蛋白对平稳令人满意的T蛋白其会的消除更尖锐。SP第三组用深蓝色的本站和红色指出，HD第三组用黑色的本站和红色指出，绿色的本站/红色指出小分子sp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白透过分选。CD4+CD25−(应以答者)被cfsel标示，treg按捕捉到的数目滴定。用抗CD3 /28微珠其会蛋白，人才3天内透过流式蛋白法术(CD25反染)和蛋白因子研究成果。HD Treg与HD、SP或sp606应以答者共同人才。(a,b) CFSE再生(a)和CFSE消除百分百余人(b)。(c,d) CD25消除百分百余人(c)和CD134消除百分百余人(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才里面的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差研究成果。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们给出的结论是，来自平稳令人满意子的其会无意识CD4+Treg在GITR传达里面取得了延展和丰富，突显了再进一步研究成果Treg在1DF哮喘后果个质里面的值得注意的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28