Diabetologia：激活但功能受损的失忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消一落千丈甲自身小鼠到消失1M-肾病诊疗副作用的的转变率在成人一时期就有很好的叙述，多个去甲自身小鼠感染性的成人中会有70%在小鼠类比后10年内患上肾病，而随访15年的成人这一比率上升到84%。来得之下，占诊疗1M-肾病一半以上的M-1M-肾病的发病程序还很难赢取充分的研究。

越来越多的人开始采用分期系统来定义1M-肾病的的转变：生殖在消失多种去甲自身小鼠时进到第1期中，消失皮质醇所致时进到第2期中，消失副作用时进到第3期中。一些多发去甲自身小鼠感染性的生殖，在1期和2期，的转变较很慢，并转变为发病的1M-肾病。我们之前叙述了一两组在首次侦测到多种去甲自身小鼠样本后数10年无肾病的亦非很慢的转变者，这两组病患者人数多于，但构造非常明确。随后，我们推测去甲自身复合物酪氨酸CD8+T蛋白质加成在的转变缓很慢的病患者中会也就是说不存在，但在近期发病和由来已久的肾病病患者中会很很难侦测到。这确实声称，与的转变病患者来得，这些病患者化脓性加成的闭环增强。

更早研究声称，尽管闭环性T蛋白质(Treg)数量正常，但肾病病患者存在一些功能瑕疵，其中会还包括对IL-2的加成灵活性降低。此外，肾病病患者中会的畸变CD4+T蛋白质确实对闭环颇具抵抗性，平庸为畸变T蛋白质的依赖性向西移动，自然产生的Treg和人纤内产生的诱导Treg，以及复合物历程的CD4+T蛋白质中会IL-2加成向西移动。本研究的目地是叙述了CD4+闭环性T蛋白质(Treg)在一小群亦非缓很慢的转变者中会的构造，他们的总人数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

作法：BOX研究是一项以成年人为基础的斜向研究，在21岁以下肺炎的病患者亲属中会检查和1M-肾病的危险环境因素。我们之前叙述了长期缓很慢的转变者的构造，他们保持一致多重去甲自身小鼠感染性超过10年，但很难消失肾病的诊疗副作用，很慢性或非来受累化脓性。随后，10名继续保持一致无肾病并愿意提供大量血液样本的缓很慢的转变者纳入T和B蛋白质功能量化。在现今的研究中会，8名很慢的转变者(SP两组)，中会位年龄组43岁(31-72岁)，18 - 32岁密切关系的去甲自身小鼠感染性。所有的行动者都位处1M-肾病的转变的1期，尽管一些人随后一落千丈了去甲自身小鼠对某些复合物的感染性加成，然而，一名病患者从未位处2期数6年，但很难消失诊疗副作用，一名病患者被临床为肾病，该人脑72岁，在采集试验中样本时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在数据量化中会对该小分姪来进行了实际上审计。转化外周血单个核蛋白质(PBMCs)，采用多参数流式蛋白质奥义和T蛋白质依赖性试验中会审计小分姪中会Treg的高频率、表M-和功能。采用FlowSOM和CITRUS(聚类断定、相关联和回归)来进行无指派聚类量化，审计Treg表M-。

结果：与健康小分姪来得，来自很慢的转变纤的清醒CD4+T蛋白质的指派聚类揭示，激活的清醒CD4+ Treg高频率上升，与免疫抑制诱导的TNFR涉及蛋白(GITR)表述上升有关。一名HbA1c急剧下降的病患者与的转变缓很慢者和意味着的比对两组来得，Treg谱略有不同。功能量化声称，与健康小分姪来得，来自缓很慢的转变纤的Treg介导的CD4+畸变T蛋白质依赖性明显受到破坏。平庸为对畸变CD4+T蛋白质CD25和CD134表述的依赖性上升。

所示1 深入的表M-量化揭示，CD4+Treg亚M-在很慢的转变路由表中会上升。由FlowSOM转换成的Treg室，聚集在来自所有小分姪的活CD4+CD45RA -蛋白质上。根据标有物表述断定出10个元簇:清醒T蛋白质_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T蛋白质;HLA-DR + GITR +清醒T蛋白质;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)采用9个不同Treg标有转换成的10个元簇的MST。每个键值值得一提的是一个坦克部队(100个坦克部队)，极大的元坦克部队(10个元坦克部队)在键值两组周围成品。每个键值中会的粥所示说明单个标有的表述级别。(b)每个元聚类的热所示，以揭示整纤标有表述。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)转换成所示，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对来说金属量为每个metacluster箱支线所示(金属量> 0.05%)确定为HD和SP两组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T蛋白质(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T蛋白质(l)。蓝色左上方值得一提的是捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检查和。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 采用CITRUS的预测模M-证实，Treg高频率的上升是的转变缓很慢的徽标。分级制度依赖M-(a - f)和柑桔量化(g-k)比起SP行动者和意味着的HD行动者在CD4+CD45RA−T蛋白质上的关联。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社群的值得一提的是性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3氟化物，然后通过HLA-DR和GITR表述来进行转化，三维FlowSOM社群。(b) HD(黑点)和SP(黑斑)两组以及小分姪SP 606(蓝色)中会CD25+ cd127的高频率概述所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖M-姪集的箱支线所示;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)果树簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述风力着色，圆圈突出的簇被识别为SP和HD路由表密切关系的不同。(j)箱支线所示揭示了在SP(黑斑)和HD(灰点)两组中会，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相对来说金属量(比率)。(k)直方所示揭示每个簇的表M-(粉红色)和Treg标有相对来说表述与背景表述(蓝色);上列，存储器Treg_3;前面几天后，存储器Treg_4。背景与所有其他簇中会标有的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检查和

所示3 与健康献血者来得，的转变缓很慢者清醒treg的GITR上升。每个清醒CD4+T蛋白质元簇(清醒T蛋白质_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T蛋白质;HLA-DR + GITR +清醒T蛋白质;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个表述标有的叠加。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的表述热所示(sp606不还包括在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇中会所有HD(白色)、所有SP(蓝色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR表述串联，揭示直方所示(c)和概述所示(d)。Wilcoxon配对符号秩和检查和，p< 0.07(蓝色)所有小分姪还包括，p< 0.05(蓝色)小分姪SP 606和意味着的HD不还包括在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR表述，从分级制度依赖M-，从所有HD(白色)、所有SP(蓝色)和SP 606(蓝色)串联，揭示直方所示(e)和概述所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检查和

所示4 来自缓很慢的转变的CD4+ treg蛋白质控制畸变CD4+T蛋白质的灵活性降低。SP两组用蓝色的支线和左上方说明，HD两组用白色的支线和左上方说明，蓝色的支线/左上方说明小分姪sp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质来进行分选。CD4+CD25−(转发者)被标有为CFSE, Treg按检视的比率滴定。用抗CD3 /28微珠酪氨酸蛋白质，培育3当晚来进行流式蛋白质奥义侦测。(a-d)与CD4+转发者相对来说应该的treg培育(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培育。(a,b,f) CFSE再生(a,e)和CFSE依赖性平均值(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性平均值。采用感染性比对(激活的响应该蛋白质不含treg)测算依赖性平均值。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起测试

所示5 畸变CD4+T蛋白质对缓很慢的转变的T蛋白质酪氨酸的依赖性更寻常。SP两组用蓝色的支线和左上方说明，HD两组用白色的支线和左上方说明，蓝色的支线/左上方说明小分姪sp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质来进行分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标有，treg按检视的比率滴定。用抗CD3 /28微珠酪氨酸蛋白质，培育3当晚来进行流式蛋白质奥义(CD25反染)和蛋白质因姪量化。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同培育。(a,b) CFSE再生(a)和CFSE依赖性次之(b)。(c,d) CD25依赖性次之(c)和CD134依赖性次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育中会的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起测试

假设：我们得出的假设是，来自缓很慢的转变姪的酪氨酸清醒CD4+Treg在GITR表述中会赢取了扩展和比较丰富，忽视了全面研究Treg在1M-肾病风险生殖中会的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28